SPE技术仪器装置固相萃取柱的重复使用

更新时间：2015-12-09

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SPE技术仪器装置固相萃取柱的重复使用?

固相萃取柱生产厂商一般都强调其固相萃取柱是一次性使用的。但在实际工作中，人们为了降低成本往往希望固相萃取柱能够多次使用。我们曾经对美国瓦瑞安公司生产的Bond Elut Certify 键合硅胶固相萃取柱的重复使用的可能性进行过评估 (J. Chromatogr. 137:619 ; 1993)。当样品基液是浆时，这种固相萃取柱在经过再生后可重复使用2-3次 (保持80%以上的回收率)。也有人报道固相萃取柱可重复使用10次 (J. Chromatogr. 307:371 ;1986)。新型的薄膜型固相萃取柱的再生相对较为容易，反复使用的次数也会多一些。有人曾经试验重复使用这种固相萃取柱15次之多。对固相萃取柱的重复使用在很大程度上取决于样品基液的复杂程度。样品基液越复杂，SPE柱重复使用的可能性就越小。

固相萃取膜片(SPE disk)的重复使用也是如此，在很大程度上取决于样品基质。如果样品中的干扰物在固相萃取膜片上不保留，或虽然保留，但通过一定的清洗、再生溶剂处理后能够基本恢复其原有的功能，则可以考虑重复使用。有的可以重复使用高达10次。

对固相萃取材料的重复使用必须谨慎。首先，使用过的固相萃取柱必须进行再生。而且是在使用完后进行再生。其次，对再生后的固相萃取柱必须进行评估以保证其本底和回收率都可以接受。另外，还要考虑一下再生的成本是否值得。

SPE技术仪器装置固相萃取柱的重复使用

11. 固相萃取中的常见问题

问题

原因

解决方法

在用反相SPE柱萃取时，洗脱馏份中有水。

1. 分析物洗脱之前SPE柱没有很好的干燥。

1. 用氮气或空气干燥SPE柱：用20-100微升含60-90%甲醇的水将SPE柱上的残留水分除去。

zui后馏份中含有干扰物。

1. 干扰物与分析物被同时洗脱。

2. 干扰物来自SPE柱。

1. 在洗脱分析物之前选用中等极性的溶剂将干扰物洗涤出SPE柱。可将两种或更多中兼容的溶剂混合以达到不同的极性。

选用对分析物亲合力更大而对干扰物亲合力低的SPE柱。

用两根不同极性的SPE柱以除去干扰物。如反相柱然后离子交换柱或硅胶柱。

2. 在柱子预处理之前用洗脱溶剂洗涤SPE柱。

SPE柱流速降低或阻塞。

1. 样品存在过多的颗粒。

2. 样品溶液粘度太大。

1. 对样品进行过滤或离心。

2. 用溶剂对样品进行稀释。

反相柱从固态样品中用萃取非极性分析物。

1. 分析物不在液体溶液中。

1. 用甲醇、异丙醇或乙腈对样品进行均浆处理。然后过滤或离心，再用水对清液进行稀释为含水量为70-90%的水溶液。

用正相柱从固态样品中萃取分析物。

1. 分析物不在液体溶液中。

1. 用非极性溶剂 (如: 正己烷、石油醚、氯仿等)均浆。

用正相柱从脂肪样品中萃取分析物。

1. 脂肪可与分析物一起被洗脱出来或降低SPE柱的吸附容量。

1. 用正己烷溶解脂肪。冰冻除去凝结的脂肪。

用反相柱从含蛋白质的溶液中(、清、浆)萃取分析物。

1. 分析物与蛋白质键合使分析物通过SPE柱而没有被保留。

1. 通过改变样品的pH值或用水对样品稀释破坏蛋白键合。

2. 加酸除蛋白质 (如: HCIO4、TFA、TCA)。

3. 加有机溶剂除蛋白质 (如: 乙腈、丙酮或甲醇)。离心、然后用水或缓冲溶液将上清液稀释至有机溶剂含量少于10%。

从含有表面活性剂的溶液中萃取分析物。

1. 表面活性剂与SPE柱表面起作用。

1. 如果分析物是非离子状态，可用离子交换柱除去表面活性剂离子。

2. 用二醇基柱除去非离子化的表面活性剂。

用常规柱 (60Å)萃。取蛋白质的回收率低。

1. 蛋白质体积太大不能进入萃取柱的微孔。

2. 蛋白质不可逆地被吸附在反相SPE柱上。蛋白质在SPE柱担体微孔内变性。

1. 用BAKERBOND大孔径反相柱或离子交换柱。

2. 用BAKERBOND大孔径反相柱或离子交换柱。

分析物回收率低

被吸附在萃取柱上

(如分析物与基液一起通过SPE柱)

1. SPE柱没有很好地被预处理。

2. SPE柱的极性不合适。

3. 分析物对样品溶液的亲合力远远大于对SPE柱的亲合力。

4. 当大体积水样品。

5. 通过SPE柱时，反相柱担体失去柱子预处理时留下的甲醇。

1. 反相柱: 用甲醇、异丙醇或乙腈处理柱子，然后用稀释样品的溶剂处理柱子。注意不能让SPE柱变干。

2. 选择对分析物有明显选择性的SPE柱。

3. 改变极性或样品溶液的pH使分析物在样品溶液中的亲合力降低。

4. 在样品溶液中加入1-2%的甲醇或异丙醇或乙腈。

分析物回收率低

分析物没有被洗脱出SPE柱

1. SPE柱的极性不合适。

2. 洗脱溶剂不够强，无法将分析物从SPE柱上洗脱。

3. 洗脱溶剂体积太小

4. 分析物被不可逆地吸附在SPE担体上。担体-分析物作用力太强。

1. 选择其它低极性或选择性弱的SPE柱。

2. 改变洗脱溶剂的pH值以增加其对分析物的亲合力。

3. 增加溶剂体积。

4. 反相: 选择疏水性弱的担体。如果原来用的是C18，则改为C8、C2或CN。

阳离子交换: 用羧酸取代苯磺酸。

阴离子交换: 用伯、仲胺代替叔胺。

萃取重现性差

1. 在添加样品之前SPE柱已枯。

2. SPE柱超容量。

3. 样品过柱流速太快。

4. 洗脱液流速太快。

5. 分析物在样品中的溶解度太大，分析物在样品过柱时与样品同时通过柱子而没有被保留。

6. SPE柱用极性溶剂处理而洗脱溶剂是不兼容的非极性溶剂。

7. 洗涤杂质用的溶剂太强，部分分析物与杂质同时被从SPE柱洗涤。分析物在这一步损失的多少取决于洗涤溶剂的流速、SPE的特性以及洗涤溶剂的体积。

8. 洗脱剂的体积太小。

1. 重新进行SPE柱预处理。

2. 减少样品量或选择大容量柱。

3. 降低流速。特别是离子交换时流速应低于5 mL/min。

4.在使用外力之前让洗脱液渗透过柱。两次500微升洗脱可能比一次1000微升更有效。

5. 通过改变样品极性或pH值而改变分析物的溶解度。

6. 在使用非极性溶剂之前对SPE柱进行干燥。

7. 降低洗涤溶剂的强度。

8. 增加洗脱溶剂的体积。

SPE技术仪器装置固相萃取柱的重复使用

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固相萃取装置原理及特点

固相萃取(Solid-Phase Extraction 简称ＳＰＥ)是近年发展起来一种样品预处理技术, 由液固萃取和柱液相色谱技术结合发展而来 , 主要用于样品的分离、纯化和浓缩,与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率、更有效的将分析物与干扰组分分离减少样品预处理过程，操作简单，省时，省力。广泛的应用在、食品、环保、商检、农药残留等领域

⑴ 小心地取出固相萃取装置，轻放于工作台上。

⑵ 小心地取出SPE装置上盖板(轻拿轻放以免碰坏小管)，将标准试管插入真空仓内隔板孔中，然后，将上干盖板盖好，并保证盖板下导流管与试管一一对应好，盖板方形密封圈与真空仓有很好的密封性。如果不易密封，可用橡皮箍箍紧，以增加密封性。

如果选购了独立调节就要先将调节阀插入盖板萃取孔中；

⑷ 如果一次不需要做12或24个样品，不用的萃取孔插上针管密阀；

⑸ 如选购了独立调节阀，将不用的萃取孔的调节阀旋钮旋到水平密封状态；

将固相萃取小柱插入到上盖萃取孔中或阀孔内（将调节阀旋钮旋到直立打开状态）；用胶管连接萃取装置和真空泵，拧紧压力调节阀门；

⑺ 将需要萃取的样品或试剂分别注入到萃取柱中，启动真空泵，则萃取柱中的样品将在负压力的作用下通过萃取柱流到下面的试管中。此时可通过调节减压阀来调节控制液体流速。

（8）待针管内液体抽完后关闭真空泵，将富集柱从装置上拔下，取下装置上盖板，拿出试管倒掉。

如不想用试管接液，可将试管架取出，放入合适大小的容器，*次萃取后取出倒掉。

再将干净试管放入装置，盖好上盖板，插好SPE小柱，用所需萃取溶剂加入针管，启动真空泵，至液体抽干后关掉电源，取出试管备用。萃取制样完毕。

将试管放入氮气吹干仪中用氮气吹扫浓缩，制备完毕。

处理好试管中的溶剂，并将试管冲洗干净以备再用。

为了节省SPE柱的使用成本，每次使用后，应将SPE柱用淋洗液冲洗干净，保证其填料的活性。

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